用途最广的检测技术，从DNA到RNA检测，从mRNA检测到circRNA检测，从食品安全到病毒微生物检测，提供可重复的，可靠的检测结果。

实时定量PCR（Quantitative Real-Time PCR，qPCR）是一种革命性的分子生物学技术，它能够在PCR扩增过程中实时监测DNA产物的积累，从而实现对起始模板的精确定量。这项技术自20世纪90年代中期发展以来，已成为基因表达分析、病原体检测和基因分型等领域的金标准。

技术原理

qPCR的核心原理是通过荧光信号来实时监测PCR产物的积累。主要分为两大类检测方法：

1.非特异性荧光染料法：使用SYBR Green等染料，可结合所有双链DNA分子

2.特异性探针法：如TaqMan探针、分子信标等，只检测特定序列的扩增产物

在扩增过程中，荧光信号随着产物增加而增强，通过监测荧光达到设定阈值的循环数（Ct值），可以推算起始模板量。

染料法原理 

探针法原理

qPCR优势

-高灵敏度：可检测单拷贝基因

-宽动态范围：可达7-8个数量级

-高特异性：特别是使用探针法时

-无需后处理：避免电泳等后续步骤带来的污染

-高通量：可同时分析多个样本

应用领域

1. 基因表达分析：定量mRNA水平，研究基因调控

2. 病原体检测：病毒、细菌等微生物的定量检测

3. 转基因检测：GMO成分的定量分析

4. SNP分型：单核苷酸多态性分析

5. microRNA研究：微小RNA的定量检测

6. 药物研发：药效评估和药物靶点研究

实验流程

1. 样品制备：提取高质量DNA/RNA

2. 反转录（仅对RNA样品）：将RNA转为cDNA

3. 反应体系配置：引物、探针、酶、dNTPs等

4. PCR扩增：在qPCR仪上运行程序

5. 数据分析：使用专用软件分析Ct值和定量结果